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Histologie

Bei Wistar-Ratten

Mit freundlicher Genehmigung des Labors für Pathologie, Abteilung für Medizin, Medizinische Fakultät von Ribeirão Preto – USP

histologie

01

Studie
Gruppe

Experimentatoren : R.Mené,M.Kim,A.Tenenbaum

N= 29 Wistar-Ratten
Durchschnittsgewicht : 421 g

Herkunft der Tiere : Biotério Central des Campus von Ribeirão Preto der Universität São Paulo
Versorgung : Experimentelle Pathologie Labor der Pathologie-Abteilung der Medizinischen Fakultät von Ribeirão Preto – USP
Unterbringung der Tiere : Polypropylen-Boxen
Futter : Standard-Laborfutter und Wasser
Lichtbedingungen : natürliche Hell/Dunkel-Zyklen unter kontrollierten Standardbedingungen
Experimentatoren : A.Tenenbaum,R.Mené,Kim

Abteilung für Pathologie

02

Euthanasie der Tiere & histologische Proben

Konventionelle Mikroskopie

Die Mäuse wurden in CO2-Kammern euthanasiert.

  • Hautinzision mit einer Klinge Nr. 23
  • Auffinden und Freilegen des pretibialen Muskels mit Metzenbaum-Scheren
  • Durchtrennung der Sehnen mit einer Mayo-Schere.
  • Fixierung von Muskelproben auf Korkplatten
  • Einbettung unter Verwendung von 10% gepufferter Formaldehydlösung und 50% reinem Paraffin für die konventionelle lichtmikroskopische Untersuchung.
  • Anfärben der Schnitte als routinemäßiger histologischer Prozess.
  • Mikrotom verwendet : Leika RM 2155
  • Färbung der Muskelquerschnitte mit

-Hämatoxylin-Eosin
-Masson-Trichrom
-und Picro-Sirius-Rot.

  • Histologische Untersuchung wurde mit einem konventionellen Mikroskop durchgeführt (Olympus BH-2).
  • Beobachtung unter polarisiertem Licht
  • Fotografische Dokumentation erfolgte mit einem Leika DMR-Mikroskop verbunden mit einer Digitalkamera Leika CD 300F und einem kompatiblen PC.
Mikrotom

03

Material

6 Ratten/Box
  • Die Tiere wurden in 6 Boxen eingeteilt, wobei die Boxen Nummer 1 bis 5 jeweils 5 Ratten und Box Nummer 6 4 Ratten enthielten 
  • Alle Tiere wurden einer Gangbewertung anhand von Fußabdrücken auf speziellem Papier unterzogen, nach vorherigem Eintauchen der Hinterbeine in eine Seifenlösung. 
  • Box 1 enthielt die Kontrollgruppe, die die Applikation von 0,1 ml Kochsalzlösung ( NaCl 0,9%) in den rechten pretibialen Muskel erhielt. 
  • Die Tiere der Boxen 2 bis 5 erhielten 0,1 ml des Endopeel Original-Hauptprodukts in denselben Muskel wie die Kontrollgruppe.

  • Box 6 bestand aus 4 Ratten, und jede erhielt 0,5 ml des Endopeel Original-Hauptprodukts subkutan injiziert. 

  • Alle Tiere wurden vor und nach ihren jeweiligen Injektionen einer Gangbewertung unterzogen.

Boxen für Ratten

04

Methoden

Tiere werden nach 10 Tagen - 1 Monat - 3 Monaten - 7 Monaten euthanasiert
Euthanasie-Tabelle

05

Kontrolle

Nach Injektion von NaCl 0,5%

Kommentar : Nach Injektion der Kochsalzlösung nichts zu berichten

ohne Behandlung

L:Pretibial-Keine Behandlung

R:Pretibial-Nach 0,1 ml NaCl 0,9% IM

06

10 Tage nach Endopeel-Injektion

Box 2

10 Tage nach Endopeel-Injektion 0,1 ml in den rechten pretibialen Muskel.

Hier sieht man die Bildung der Vakuolen, die von Lymphozyten umgeben sind. Vakuolen unterscheiden sich von Gewebsnekrose . Das Vorhandensein von Lymphozyten steht in Zusammenhang mit der Permeabilität der Zellmembranen.

 

linke Kontrolle- 100xD10

L : Kontrolle-100xD10

rechts 100xD10

R:100xD10

rechts200xx

R :200xD10

rechts400xxD10

R :400xD10

07

1 Monat nach Endopeel-Injektion

Box 3

1 Monat nach Endopeel-Injektion 0,1 ml in den rechten pretibialen Muskel.
Was auf den Bildern schwarz erscheint, ist keine Nekrose, wie einige Wissenschaftler vielleicht annehmen würden!
Tatsächlich sind vier Schlussfolgerungen zu berücksichtigen

  • ein Färbungsartefakt
  • das Fehlen von Nekrose
  • eine Apoptose
  • ein bioregenerativer Prozess 
linke Kontrolle- 100xD30

L : Kontrolle-100xD30

rechts 100x

R:100xD30

rechts400xxD30

R :400xD30

08

3 Monate nach Endopeel-Injektion

Box 4

3 Monate (D90) nach Endopeel-Injektion 0,1 ml in den rechten pretibialen Muskel.

linke Kontrolle- 100xD90

L : Kontrolle-100xD90

rechts 100x

R:100xD90

09

7 Monate nach Endopeel-Injektion

Box 5

7 Monate (D210) nach intramuskulärer Endopeel-Injektion 0,1 ml in den rechten pretibialen Muskel.

Komplette Restitutio ad integrum nach 7 Monaten

linke Kontrolle- 100xD210

L : Kontrolle-100xD210

rechts 100x

R:100xD210

L Kontrolle 50xD210

L :Kontrolle 50xD210

R50X-D210

R50X-D210


10

Endopeel-Injektion in das subkutane Gewebe

Box 6

0,5 ml ( 5x 0,1ml)  Endopeel SC-Injektion im rechten subkutanen pretibialen Bereich.

L:200x-Kontrolle-SC

R-D10-SC-200X

R-D10-SC-200X

R-D30-SC-200X

R-D30-SC-200X

R-D90-SC-200X

R-D90-SC-200X

R-D210-SC-200X

R-D210-SC-200X

R-D210-SC-400X

R-D210-SC-400X


Schlussfolgerungen
    • Endopeel induziert eine selektive reversible Myofibrolyse und eine entzündliche Reaktion über einen Zeitraum von etwa 1 Monat, ungefähr
    • Muskelveränderungen sind nahezu vollständig reversibel
    • Der Muskel ist der bessere Ort, Endopeel zu injizieren, wegen höherer Wirksamkeit, Kontrolle und der Dauer seiner Wirkung
    • Weder Nekrosen noch Abszesse wurden während der gesamten Studie festgestellt.

Weitere Studie zur Anwendung in der Gynäkologie

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